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案例分享︱见证hPSC的高效培养

案例分享︱见证hPSC的高效培养

  • 分类:新闻
  • 作者:澳门新莆京游戏大厅
  • 来源:澳门新莆京游戏大厅
  • 发布时间:2023-11-03
  • 访问量:73

【概要描述】hPSC可在澳门新莆京游戏大厅的3D FloTrix® miniSPIN 生物反应器中均匀成团并稳定生长,细胞4天可增殖3倍以上。

案例分享︱见证hPSC的高效培养

【概要描述】hPSC可在澳门新莆京游戏大厅的3D FloTrix® miniSPIN 生物反应器中均匀成团并稳定生长,细胞4天可增殖3倍以上。

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  • 作者:澳门新莆京游戏大厅
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  • 发布时间:2023-11-03
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【前言】

背景:

人多能干细胞(hPSC)研究已经在再生医学、疾病建模、药物筛选和发现以及基于干细胞的治疗方面取得了重大进展。

局限:

在相关临床应用中,需要大量hPSC,而稳定的大规模hPSC生产制备仍受到传统二维培养的限制:无法满足hPSC扩增需要的足够表面积,并因此产生了更高的耗材试剂成本和时间成本。

突破:

hPSC可以通过聚集体的形式进行悬浮培养,3D悬浮培养可以支持更高密度的hPSC生长,显著降低培养基使用量,适用于规模化hPSC放大培养的多种应用。

在hPSC悬浮培养过程中,聚集体的控制是非常重要的,特别是在早期聚集体的形成阶段。因此,产生许多大小可控的团聚体,且能形成均匀的混合效果,使细胞能稳定生长极其重要。

hPSC可在澳门新莆京游戏大厅的3D FloTrix® miniSPIN 生物反应器中均匀成团并稳定生长,细胞4天可增殖3倍以上,多能性相关指标SSEA4与OCT4阳性率可维持在90%以上,是理想的hPSC悬浮培养系统。

 

【hPSC 培养案例】

1. 培养方法

① 125mL转瓶准备

将125mL玻璃转瓶清洗干净,安装桨叶时尽量调整桨叶位置使其靠近转瓶底部,桨叶位置过高将导致细胞无法形成聚集体。

安装好后进行高压蒸汽灭菌、烘干备用。(若使用一次性转瓶则无需进行此步骤。)

② 细胞复苏

提前将完全培养基恢复至室温,复苏hPSC细胞,以5×105/mL的密度接种于125mL转瓶中,培养基为含ROCK抑制剂的(10μM Y27632)的mTeSR培养基。

将转瓶置于3D FloTrix® miniSPIN反应器上,70rpm避光培养过夜。培养体系30-65 mL。

③ 细胞换液

hPSC细胞悬浮培养需要每天进行半换液。将转瓶在超净工作台上静置5min,从液面靠上方吸取一半培养液到50 mL离心管中,适当吹打转瓶中的培养液防止聚集体融合。

将装有培养液的50 mL离心管离心,吸弃上清,加入等体积不含ROCK抑制剂的mTeSR培养基,将培养液转移到转瓶中。

将转瓶放到反应器上继续培养。注意操作过程中细胞聚集体不可静置超过15min,否则会促使聚集体发生融合。

④ 细胞传代

细胞培养4~5天,镜下观察细胞聚集体粒径在250-350μm范围时可进行传代操作,粒径不可超过400μm,否则会影响细胞干性。

使用Accutase消化液将细胞聚集体消化15min,单细胞进行传代,传代密度为5×105/mL,搅拌速度70rpm。

 

2. 培养效果


在3D FloTrix® miniSPIN反应器上,细胞成团均一,呈圆润球形。

随培养时间增加,聚集体粒径增加,培养4天粒径为222±37μm,细胞增殖3倍以上,细胞活率维持在90%以上。

同时,hPSC干性Marker SSEA4与OCT4双阳比率维持在95%以上,表明细胞在培养过程中维持良好的分化功能。

 

【结论】

使用3D FloTrix® miniSPIN反应器可以很好的进行hPSC细胞的悬浮培养,可应用于hPSC细胞的扩增、建库与分化。

结合反应器具备的多点控制功能,可用于hPSC细胞分化过程中的条件摸索,反应器配备的125mL培养瓶可通过高压灭菌重复使用,节省耗材设备成本,是理想的hPSC悬浮培养系统。

 

【相关样品】

3D FloTrix® miniSPIN 生物反应器

▶ 体型小,节省空间,便于放置于不同规格的培养箱中使用。

▶ 主机与控制器分离,不需频繁开启培养箱箱门即可实时操控主机转速。

▶ S1,外形结构小巧;M2,控制模式多样,满足客户不同的需求。

▶ 培养瓶125mL/250mL/500mL,多种规格可选,可高压灭菌、重复使用。

▶ 超低速搅拌设计的主机,转速0 ~120rpm,精度1rpm;

▶ 速度低精度高的平稳运行,能有效提高细胞生长率的同时,可避免搅拌过程中剪切力对细胞的损伤。

▶ 4.3寸触控屏幕的控制器,界面友好,操作简单;

▶ 可实现恒速/变速双模控制,并且具备编程功能,可满足不同的实验需求。

 

 

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【关于澳门新莆京游戏大厅】

澳门新莆京游戏大厅成立于2018年,由清华大学医学院杜亚楠教授科研团队领衔创建,清华大学参股共建。核心技术源于清华大学科技成果转化,并已获得多项国家级立项支持与应用。

作为高质量三维细胞制造专家,澳门新莆京游戏大厅提供基于3D微载体的一站式定制化细胞规模化扩增整体解决方案,打造了原创3D细胞智造平台,实现规模化、自动化、智能化、密闭式的细胞药物及其衍生品生产制备,以此帮助全球客户建立最为先进的细胞药物生产线。在开创【百亿量级】干细胞制备工艺管线后,加速向【千亿量级】进发,致力于以3D细胞规模化智造技术赋能细胞与基因治疗产业,惠及更多患者。

目前,澳门新莆京游戏大厅的产品与服务,已广泛应用于基因与细胞治疗、细胞外囊泡、疫苗及蛋白产品等生产的上游工艺开发。同时,在再生医学、类器官与食品科技(细胞培养肉等)领域也具有广泛应用前景。

澳门新莆京游戏大厅拥有5000平米的研发与转化平台,其中包括1000余平的以3D细胞智造及微组织再生医学治疗产品为核心的CDMO服务平台;以及4000平米的GMP生产平台,并新建了1200L微载体生产线。此外还在上海设有2000余平的国际合作与技术应用中心,以技术创新持续融入全球生物产业新业态。

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